Percoll的使用注意事項
更新時間:2019-05-08 點擊次數(shù):3161次
Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高達1.3g/ml密度,采用預(yù)先形成的密度梯度時可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達到滿意的細胞分離結(jié)果。由于Percoll擴散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外,Percoll不穿透生物膜,對細胞無毒害,因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒,還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。
該法是純化淋巴細胞和單核細胞的一種較好的方法,淋巴細胞純度高達98%,單核細胞純度可達78%。因為Percoll具有滲透性低、不穿透細胞、粘度低、密度高和無毒害等優(yōu)點,與目前常用的密度梯度離心介質(zhì),包括蔗糖(Sucrose)、血清白蛋白(Serum albumin, ALB)、聚蔗糖(Ficoll)、氯化銫(CsCl)等相比,是目前較理想的介質(zhì)。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動物細胞及其細胞器的分離,純化了包括人血液細胞、骨髓細胞、紅血球細胞、白血球細胞、淋巴細胞、肝細胞等在內(nèi)的十余種動物細胞。這一技術(shù)也開始用于用于分離和純化植物原生質(zhì)體、核、葉綠體和線粒體。
Percoll的使用注意事項
A. 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存,啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
B. 待分離的樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好,且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
C. 由于各品牌離心機的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時間,摸索佳的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。
D. 使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。