了解一下abcam抗體防止降解、污染的方法
更新時間:2021-03-17 點擊次數(shù):1190次
今天讓我們一起來了解一下abcam抗體防止降解、污染的方法,話不多說一起來看看吧。
1、防止降解
抗體試劑稀釋至工作濃度后,建議及時使用,不建議對稀釋后的抗體進(jìn)行長時間保存。如果必須保存,建議保存于4℃并于一周以內(nèi)使用。
一般而言,蛋白質(zhì)濃度高于1mg/ml時更不容易降解,因此部分抗體試劑中加入了牛血清白蛋白(BSA)作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑來防止降解。加入的蛋白質(zhì)還能盡可能減少抗體結(jié)合到容器壁上造成的損失。
需要注意的是,請勿向?qū)⒁M(jìn)行偶聯(lián)的抗體中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑,因為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑會與抗體競爭,降低偶聯(lián)效率。
2、防止污染
為了防止微生物污染,可將*作為抗菌劑加入抗體工作液中,保持終濃度為0.02%(w/v)。Abcam的多款抗體中都含有*,濃度范圍為0.02%-0.05%。抗體數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分對此有說明。
此外,如果要對活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理,或進(jìn)行體內(nèi)研究時,請務(wù)必使用不含*的試劑。抗菌劑會阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng),對大部分生物體都有毒害作用。
高濃度的*會干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng),因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除。或可選用0.01%硫柳汞鈉(硫柳汞),這種抗菌劑不含伯胺。
抗體溶液中的*可通過透析或凝膠過濾去除。IgG的分子量為150,000Da(IgM約為600,000Da),*的分子量為65Da。截留分子量為14,000Da的微透析裝置可去除*。
透析過程在燒杯中(置于磁力攪拌器上,溫度保持4℃)進(jìn)行,每毫升抗體使用至少1升預(yù)冷的PBS,攪拌透析裝置6小時。更換PBS兩次,每次更換后均攪拌至少6小時。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌,并且應(yīng)在無菌條件下處理所得制備物。