等電聚焦電泳方法
一.儀器設備:
電泳儀,電泳槽,注射器,燒杯,量筒,試管,漏斗,濾紙,刻刀,移液器。
二.試劑配制:
1.電極緩沖液:
正極緩沖液:1mol/LH3PO4,11.5ml85%磷酸加水至100ml。
負極緩沖液:1mol/LNaOH,4g氫氧化鈉加水至100ml。
2.品提取液:
40%制糖:40g蔗糖加水至100ml。
3.順丁烯二酸緩沖液:
3.08gNaOH+5.8g順丁烯二酸加水至1000ml。
4.1%a-奈酯:
1g醋酸-a-奈酯+100ml正丁酯。
5.7%冰醋酸:
70ml冰醋酸加水至1000ml。
6.固藍RR鹽+順丁烯二酸緩沖液
三.電泳操作技術
1.樣品處理:
1)浸泡:先將所需種子浸泡一段時間,以備取胚使用。
2)取胚:用刻刀把種子的胚取出,放入1.5ml離心管管內。
3)研磨:在離心管內加入120ul提取液,將胚研成勻漿,放入冰箱保存。
2.凝膠制備:
1)配制凝膠前,應把玻璃板準備好,即將兩塊干凈的玻璃板疊放在一起,之間夾上所需凝膠厚度的膠條進行四邊密封,一端留有小口來灌膠,然后用文具夾將玻璃板四周固定好。注意夾子作用力點在膠條正中,以防漏膠。
2)配制凝膠時,先將所需儲備液自冰箱中取出放置溫室。
3)將各種儲備液按一定比例混合(見表)然后加入1ml左右的7號試劑,攪拌均勻,zui后用注射器吸凈混合液,排除氣泡,緩緩注入玻璃板的夾隙內。
4)將注入混合液的玻璃板靜置放好,隔夜使用。
載體兩性電解質
別名:兩性電解質載體:Ampholyte solution Ampholine
性狀;近無色至淺黃色透明液體,有粘性,為一中相對分子質量 300-1000的人工合成的多氨基多羧酸系列兩性化合物的復雜混合物。
溶度:為40%的溶液
用途:用于生物大分子蛋白質和酶的等電聚焦電泳
儲存:充氮密封4度干燥保存,SCRC 680007-680021
P0300 | 蛋白電泳 | 1.5M Tris-HCL(PH8.8) | 100/500ml | 46.00/160.00 |
P0220 | 蛋白電泳 | 10%過硫酸氨 | 1ml | 15.00 |
P0210 | 蛋白電泳 | 10×電泳轉移緩沖液 | 500ml | 100.00 |
P0270 | 蛋白電泳 | 10×麗春紅染液 | 10ml | 90.00 |
P0290 | 蛋白電泳 | 1M Tris-HCL (PH6.8) | 100/500ml | 40.00/160.00 |
P0230 | 蛋白電泳 | 30%丙烯酰胺/甲叉溶液(29:1) | 100ml/500ml | 60.00/180.00 |
P0250 | 蛋白電泳 | 4×SDS-PAGE分離膠緩沖液 | 100ml/500ml | 60.00/180.00 |
P0260 | 蛋白電泳 | 4×SDS-PAGE濃縮膠緩沖液 | 100/500ml | 60.00/180.00 |
P0235 | 蛋白電泳 | 40%丙烯酰胺/甲叉溶液(37.5:1) | 100/500ml | 80.00/280.00 |
P0180 | 蛋白電泳 | 5×蛋白上樣緩沖液(含DTT) | 1ml/10ml | 40.00/160.00 |
P0170 | 蛋白電泳 | 5×蛋白上樣緩沖液(配有β-巰基乙醇) | 10ml | 120 |
P0190 | 蛋白電泳 | 5×非變性蛋白上樣緩沖液 | 10ml | 100.00 |
P0171 | 蛋白電泳 | 4×蛋白上樣緩沖液(配有β-巰基乙醇) | 10ml | 100 |
P0200 | 蛋白電泳 | Tris-甘氨酸蛋白電泳緩沖液(干粉) | 10L | 180 |
P0280 | 蛋白電泳 | 考馬斯亮藍快速染色液 | 500ml | 100.00 |
P1006 | 蛋白電泳 | 載體兩性電解質PH3.5-10 | 12ml | 580.00 |