FUJIFILM Wako質譜級賴氨酰肽鏈內切酶
125-05061,質譜級賴氨酰肽鏈內切酶Lysyl Endopeptidase®產品簡介:產品品牌:Wako產品名稱:質譜級賴氨酰肽鏈內切酶LysylEndopeptidase®產品貨號:125-05061FUJIFILM Wako質譜級賴氨酰肽鏈內切酶
125-05061,質譜級賴氨酰肽鏈內切meiLysyl Endopeptidase®
125-05061,質譜級賴氨酰肽鏈內切meiLysyl Endopeptidase®產品簡介:
產品品牌:Wako
產品名稱:質譜級賴氨酰肽鏈內切meiLysylEndopeptidase®
產品貨號:125-05061
產品規格:20 ug×5
FUJIFILM Wako質譜級賴氨酰肽鏈內切酶
本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解mei即賴氨酰肽鏈內切mei,該mei可以特異性切除賴氨suan基團C末端的多肽,可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的mei合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切mei和胰mei,可更好地切斷賴氨suan基團的多肽,增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝,是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個樣品的凝膠內消化。
來源:細菌
外觀:凍干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl 緩沖液,pH8)
活性:0.03~0.07 AU/vial
分子量:27,000(瓊脂糖過濾),30,000(SDS-PAGE)
溶解性:溶于水或緩沖液
穩定性:溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩沖液中,可在4℃穩定保存2年;在 pH 值 6.0-11.0、30℃時能穩定保存,但溫度超過50℃時不穩定。
最適pH值:9.0~9.5
等電點:6.9~7.0
底物特異性:
可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA
抑制劑:DFP、PMSF、TLCK
◆特點
● 高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析
● 提高裂解效率、增加肽段數量
● 根據使用量特意制備小包裝,方便使用
◆應用
分別采用胰蛋白mei(Tp)、賴氨酰肽鏈內切mei(Lys-C)和 Tp與Lys-C 聯用進行膠內mei切的效果比較。
牛血清蛋白 BSA 的條帶(100 ng)通過 SDS-PAGE 獲得,然后分別用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進行mei切,再用 MALDI-TOFMS 法進行分析。
這些蛋白mei的實驗效果見下表。
表 1:Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結果對照
這些結果表明 Lys-C mei解的錯誤裂解率*低。Tp mei解時加入 Lys-C 后,錯誤裂解率有所降低,同時,可以鑒定出更多的多肽。
Tp | Lys-C | Lys-C+Tp | |
裂解位點 | 精氨suan和賴氨suan的C端 | 賴氨suan的C端 | 精氨suan和賴氨suan的C端 |
錯誤裂解率 (錯誤裂解所占比例 ) | 多(8%) | 很少(0%) | 少(3%) |
鑒定出的多肽數量 | 17 | 19 | 22 |
胰蛋白mei(Tp)(圖 a)和賴氨酰肽鏈內切mei(Lys-C)+Tp( 圖 b)mei切后的質譜結果對照圖。
Lys-C+Tp mei切后,可以在 m/z=2000 時得到吸收峰,而單獨的 Tp mei切在 m/z=2000 時沒有吸收峰。該結果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度。
( 數據由大阪醫療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada 博士提供 )
賴氨酰肽鏈內切mei
賴氨酰肽鏈內切mei,最初由 Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該mei可以特異性剪切賴氨suan殘基C末端和S-氨乙基半胱氨suan殘基的肽鍵,用于蛋白測序和 Lys-X 化合物的mei催化合成。該mei穩定性高,在4M尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育6小時之后,仍然擁有完整的生物活性。
外觀 | 凍干粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer,pH 8) | 活性 | 見包裝 |
分子量 | 27,000(凝膠過濾);30,000 (SDS-PAGE) | 溶解性 | 易溶于水或緩沖液 |
優良pH | 9.0-9.5(酰胺mei的優良活性 pH) | 等電點 | 6.9-7.0 |
抑制劑 | DFP、PMSF、TLCK | 來源 | 細菌 |
穩定性 | 溶于pH 值 5.0-12.0 的緩沖液中,可于4℃穩定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的緩沖液中,可于30℃穩 定保存,但是50℃及以上不穩定。 | ||
單位定義 | 一單位酰胺mei(AU)指在30℃ pH 9.5 時每分鐘產生1 μmol 對硝基苯胺所需的mei量。 | ||
底物特異性 | 水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA | ||
非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA |
產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 |
Wako 125-05061 | Lysyl Endopeptidase®, MS Grade | 20 μg×5 | 質譜級 |
FUJIFILM Wako質譜級賴氨酰肽鏈內切酶